Flubromazepam 8 MG Pellet

Richtlijn onderzoeksmethodologische: Analisi e analisi farmacologica del Flubromazepam

1. Titolo della ricerca
Un titolo specifico, da non sottovalutare:
“Analisi forense-tossicologica del flubromazepam: Methodenontwikkeling, validatie en een casestudie naar kinetiek bijen intoxicatie”.”
di
“Metabolizzazione in vitro e rivelazione di una benzodiazepina di marca langherese, il flubromazepam”.”

2. Integrazione e soluzione dei problemi

• Achtergrond: Introdurre il flubromazepam (7-broom-5-(2-fluorfenyl)-1,3-dihydro-2H-1,4-benzodiazepine-2-on) come ‘Designer Benzodiazepine’ (DBZD) di ‘Nieuwe Psychoactieve Stof’ (NPS). Si tratta di una differenza di struttura rispetto al fenazepam, di un tempo di eliminazione molto lungo (>100 uur) e dell'utilizzo come droga ricreativa e come mezzo per l'automedicazione.

• Problemstelling: Individuare i consumi specifici. L'estrema lunghezza del tempo di dimezzamento comporta un'intossicazione prolungata e un cumulo di sostanze nel suo utilizzo. Si tratta di un problema che riguarda i metodi di valutazione per lo screening tossicologico di routine, e il profilo dei metaboliti è sempre più diffuso, in quanto la sua rilevazione nelle urine è necessaria.

• Onderzoeksvraag: Formuleer de central vraag, bijv.: “Wat zijn de prestatiekenmerken van een gevalideerde UPLC-MS/MS methode voor flubromazepam, en welke metabolieten kunnen worden geïdentificeerd als forensisch bruikbare biomarkers voor consumptie?”.”

• Doelstellingen:

  • Zoccolo: L'analisi e la valutazione clinico-tossicologica di un metodo specifico per la valutazione del flubromazepam e dei suoi principali metaboliti in matrici umane.

  • Specifiche richieste:

    1. Ottimizzazione di un'efficiente manipolazione del mostro per l'estrazione simultanea di flubromazepam e dei suoi metaboliti nel siero e nelle urine.

    2. Validazione di un metodo UPLC-MS/MS secondo i criteri dell'Internationale Organisatie voor Standaardisatie (ISO/IEC 17025) e del SWGTOX.

    3. Il karakteriseren del in vitro metabolietenprofiel met behulp van humane levermicrosomen en hoog-resolutie massaspectrometrie (HRMS).

    4. Un'analisi retrospettiva dei casi forensi più eclatanti, per eliminare le concentrazioni dalle presentazioni cliniche.

3. Letteratura

• Revisione sistematica della letteratura scientifica e dei casi clinici sul flubromazepam.

• Analizzare la struttura chimica, le caratteristiche chimico-fisiche (log P, pKa) e analizzare il metabolismo sulla base delle benzodiazepine.

• Esaminare i migliori metodi di analisi per le altre benzodiazepine di lingua inglese (tra cui diazepam, nordazepam).

• Banche dati del Nederlands Forensisch Instituut (NFI), dell'OEDT e delle pubblicazioni scientifiche sulle intossicazioni.

4. Metodologia onderzoeks (Materiaal en Methoden)

• 4.1 Tipo Onderzoek: Experimenteel, methodologisch en observationeel (retrospectieve casusanalyse).

• 4.2 Studio di settore: Esperimenti di laboratorio (in vitro) e analisi di mostri ance verzamelde.

• 4.3 Materia:

  • Stoffen: Flubromazepam-referentiestandaard (via erkende leverancier of forensische partner). Standard interno gelabelde (tramite Diazepam-d5 o un'altra benzodiazepina gelabelde stabile). Leva di controllo mensile. Sieri e urine di controllo.

  • Apparatuur: Sistema UPLC-MS/MS (bijv. Waters Xevo TQ-S), sistema HRMS (bijv. Thermo Q Exactive), SPE-vacuümstation, centrifuga, pH-metro.

• 4.4 Metodi:

  • Monstervoorbehandeling: Utilizzate l'estrazione a base di vaste sostanze (SPE) con cartucce a modalità gemmata (bv. Oasis MCX) per ottenere un'estrazione ottimale delle materie prime di base e dei loro metaboliti.

  • Strumento di analisi (Kwantificering - UPLC-MS/MS):

    • Cromatografia: Korte UPLC C18 kolom voor snelle scheiding. Fase mobile: tampone di ammonio e metanolo.

    • Massaspectrometrie: Modalità ESI+. Inserire due transazioni MRM per stof per l'identificazione e la conferma. Ottimizzare la tensione del cono e l'energia di collisione.

  • Validazione: È disponibile una validazione completa che comprende: linearità (1-500 ng/mL), precisione e nauwkeurigheid (bij LLOQ, laag, midden, hoog), estrazione, effetti di matrice (in matrici diverse), stabilità e carry-over.

  • Screening dei metaboliti (HRMS): Incubare il flubromazepam con i levermicrosomen NADPH-verrijkte. Utilizzare l'acquisizione dei dati (DDA) per verificare sia gli ioni precursori che gli spettri dei frammenti MS2. Analizzare i dati con un software (bv. Compound Discoverer) per individuare i metabolieten attraverso le biotrasformazioni (tra cui idrossilazione, N-desalchilazione, riduzione).

  • Casusanalyse: Pas de gevalideerde methode toe op een set gedeïdentificeerde serummonsters van vermoede intoxicaties uit het ziekenhuisarchief (na ethische goedkeuring).

5. Analisi dei dati e statistiche

• Utilizzate la regressione lineare con un valore di 1/x² per le curve di calibrazione.

• Precisione e sicurezza sul lavoro con un'alimentazione a basso costo, standardizzata e con un'alimentazione a basso costo.

• Per i dati del caso: utilizzare statistiche dettagliate (media, intervallo) per le concentrazioni corrette.

6. Percorsi etici, di protezione e di benessere

• Veiligheid: Il flubromazepam è uno stufato psicoacetico di lunga durata e di grande rischio per la depressione centrale e cumulativa. Utilizzate tutte le manovre in un ambiente controllato: zuurkast, handschoenen (nitril), labjas e veiligheidsbril. Le procedure per l'apertura della valvola sono state applicate dal manutentore.

• Kader bagnato: Il flubromazepam è molto utile per i pazienti che non hanno bisogno di cure. La seconda edizione dell'Opiumwet. L'utilizzo e l'uso di strumenti di lavoro sono di grande utilità per la salute e la sicurezza. specifiche di vergunning in base al tipo di bagnato. Avviare la procedura di aanvraag con un'istanza diversa (in base alla Centrale Dienst voor In- en Uitvoer o alla data di inizio dell'istallazione) per avviare la procedura.

• Etica: Per l'analisi retrospettiva dei pazienti-mostri è l'apertura di un'apertura per la rimozione dei rifiuti di goedkeuring door een Medisch-Ethische Toetsingscommissie (METC) vereist, aangezien het gaat over secundair gebruik van persoonsgegevens en lichaamsmateriaal.

7. Tijdsplanning (diagramma di Gantt)

• Fase 1 (M1-3): Studio letterario, analisi dei dati (Opiumwet) e analisi etica.

• Fase 2 (M4-6): Ottimizzazione del metodo SPE e UPLC-MS/MS.

• Fase 3 (M7-8): Validazione completa del metodo di valutazione dei dati.

• Fase 4 (M9-10): In vitro Studi di metabolismo con HRMS.

• Fase 5 (M11-12): Analisi dei casi, integrazione dei dati e rapporto.

8. Risultati e discussioni (Kader)

• È un metodo robusto e valido che può essere utilizzato nei laboratori forensi e clinici.

• Identificazione del 3-idrossi-flubromazepam e/o del desalchil-flubromazepam come primo metabolizzatore, fondamentale per gli esami delle urine.

• Inchiesta sulle concentrazioni rilevanti dal punto di vista clinico e sulla cinetica di lingua, che è importante per il trattamento e l'interpretazione.

9. La valutazione della ricerca

• In vitro metabolisme può variare da in vivo metabolizzazione nei pazienti.

• Studio retrospettivo: le informazioni cliniche per caso possono essere utili.

• La sintesi e l'analisi dei metabolieten-standaarden per la conferma è un'attività di ricerca.

10. Referenti

• Utilizza un riferimento coerente (bv. APA).

• Da dove viene:

  • SWGTOX e ICH per la convalida.

  • Pubblicizzazione delle benzodiazepine di marca (bv. Moosmann et al., 2019).

  • Rapporti ufficiali dell'OEDT e dell'Istituto Trimbos.

  • Il progetto dell'Opiumwet olandese.

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Essentiële Nederlandse Termen:

• Flubromazepam = Flubromazepam

• Langwerkende benzodiazepine = benzodiazepina di Langwerkende

• Eliminatiehalfwaardetijd = Eliminatiehalfwaardetijd

• UPLC-MS/MS = UPLC-MS/MS

• Vaste-fase-estratto (SPE) = Vaste-fase-estratto (SPE)

• Metabolietenprofiel = Metabolietenprofiel

• Biomarcatore = Biomarcatore

• ISO/IEC 17025 = ISO/IEC 17025

• Analisi retrospettiva = Analisi retrospettiva

• Medisch-Ethische Toetsingscommissie (METC) = Medisch-Ethische Toetsingscommissie (METC)

Ottima qualità di vita: Il documento è utilizzabile come accademico. Un'analisi approfondita di questo potente e potente strumento di lavoro. alleen sono stati realizzati in un laboratorio daartoe bagnato, con tutti i controlli previsti e con i protocolli etici e di tutela della privacy.