Deschloroketamine 20mg Pellets

DCK 20mg Pellets

Onderzoeksmethodologische Richtlijn: Analytische en Farmacologische Evaluatie van Deschloroketamine in Pellets

1. Titolo della ricerca
Un titolo specifico, da non sottovalutare:
“Forensisch-farmacologische profilering van Deschloroketamine (DCK) pellets: Kwaliteitsanalyse, in-vitro dissolutie en beoordeling van het glutamaterge werkingsmechanisme.”
di
“Kwantificering, metabolietenscreening en neurotoxische potentie van de dissociatieve NPS Deschloroketamine in vaste doseringsvorm.”

2. Integrazione e soluzione dei problemi

• Achtergrond: Introduceer Deschloroketamine (DCK, 2-(methylamino)-2-phenylcyclohexanone) als een synthetische dissociatieve stof uit de arylcyclohexylamine-klasse, structureel analoog aan ketamine maar zonder het chlooratoom. Beschrijf de verwachte werking als niet-competitieve NMDA-receptorantagonist, met effecten zoals dissociatie, analgetica en mogelijke cognitieve verstoring. Benadruk de opkomst als Nieuwe Psychoactieve Stof (NPS) op de illegale markt, verkocht als 20 mg pellets – een doseringsvorm die een zekere “controle” suggereert maar volledig ongereguleerd is.

• Problemstelling: Identificeer de specifieke gevaren en kennislacunes. De werkelijke dosis DCK per pellet kan sterk variëren, wat leidt tot onvoorspelbare en potentieel langdurige dissociatieve episodes of psychotische reacties. De farmacologische potentie ten opzichte van ketamine en de neurotoxische risico’s (o.a. Olney’s lesions) zijn onbekend. Pellets kunnen verontreinigd zijn met andere dissociatieven (zoals 2-FDCK, O-PCE) of synthese-afval.

• Onderzoeksvraag: “Wat is de farmaceutische kwaliteit (dosis, zuiverheid) van illegaal verhandelde Deschloroketamine 20 mg pellets, en wat zijn de in vitro farmacologische kenmerken (NMDA-receptor affiniteit) en acute neurotoxische potentie van de geïsoleerde stof?”

• Doelstellingen:

  • Zoccolo: Het uitvoeren van een multidisciplinaire risicobeoordeling van DCK-pellets, van chemische analyse tot functionele neurowetenschappelijke screening.

  • Specifiche richieste:

    1. Ontwikkelen en valideren van een gevoelige LC-MS/MS methode voor de kwantificering van DCK en mogelijke structurele analogen.

    2. Bepalen van de dosisuniformiteit en het gemiddelde DCK-gehalte over meerdere pellets uit verschillende batches.

    3. Screenen op de aanwezigheid van verontreinigingen en metabolieten via niet-doelgerichte LC-HRMS.

    4. Bepalen van de in vitro affiniteit van gezuiverd DCK voor de NMDA-receptor met behulp van een competitieve radioligand-bindingsassay ([³H]MK-801).

    5. Evalueren van de acute neurotoxische potentie in een primaire neuronale celkweek door meting van celviabiliteit (MTT-assay) en extracellulaire glutamaatspiegels na blootstelling.

3. Letteratura

• Review van de schaarse wetenschappelijke literatuur over DCK en structureel verwante arylcyclohexylaminen.

• Analyse van gebruikersrapporten en forensische casusbeschrijvingen.

• Studie van gevestigde analytische methoden voor ketamine en zijn metabolieten.

• Raadpleging van neurofarmacologische literatuur over NMDA-receptor antagonisten en excitotoxiciteit.

4. Metodologia onderzoeks (Materiaal en Methoden)

• 4.1 Tipo Onderzoek: Experimenteel, analytisch en in vitro neurofarmacologisch onderzoek.

• 4.2 Studio di settore: Laboratoriumanalyse van pellets en celkweek-gebaseerde experimenten.

• 4.3 Materia:

  • Stoffen: DCK referentiestandaard (indien beschikbaar). Radioligand [³H]MK-801. Primaire corticale neuronen van rattenembryo’s.

  • Apparatuur: LC-MS/MS, LC-HRMS (QTOF), radioligand bindingsassay-opstelling (scintillatieteller), weefselkweekfaciliteit, fluorimeter/spectrofotometer.

• 4.4 Metodi:

  • Monstervoorbereiding: Verpulver individuele pellets nauwkeurig. Los een exacte hoeveelheid op voor LC-MS/MS analyse en voor zuivering (indien nodig).

  • Kwantificering en Validatie (LC-MS/MS):

    • Cromatografia: Gebruik een HILIC- of reversed-phase kolom voor scheiding van DCK van mogelijke isomeren.

    • Massaspectrometrie: ESI+ modus. Stel MRM-transities in voor DCK ([M+H]+ → karakteristieke fragmenten).

    • Validazione: Valideer voor lineariteit (0.5 – 50 ng/mL), precisie, nauwkeurigheid, LOD/LOQ.

  • Dosisuniformiteit: Analyseer 10 pellets per batch. Bereken gemiddelde en RSD%.

  • Screening (LC-HRMS): Voer een niet-doelgerichte screening uit om te zoeken naar andere arylcyclohexylaminen of degradatieproducten.

  • In vitro NMDA-Receptor Bindingsassay:

    • Gebruik rattenhersenmembranen (cortex/hippocampus).

    • Incubeer met [³H]MK-801 en toenemende concentraties gezuiverd DCK.

    • Bepaal de IC50 en bereken de Ki-waarde voor de PCP-bindingsplaats van de NMDA-receptor. Vergelijk met ketamine als positieve controle.

  • In vitro Neurotoxiciteit op Primaire Neuronen:

    • Kweek primaire corticale neuronen van E18-ratten gedurende 7-10 dagen (DIV).

    • Behandel neuronen met een reeks concentraties DCK (en ketamine als referentie) gedurende 24 uur.

    • Meet celviabiliteit met de MTT-assay.

    • Meet de concentratie extracellulair glutamaat in het medium met een fluorimetrische enzymassay als indicator voor excitotoxiciteit.

5. Analisi dei dati e statistiche

• Kwantitatieve data analyseren met kalibratielijnen.

• Bindingsassay data fitten met niet-lineaire regressie om IC50/Ki te bepalen.

• Neurotoxiciteitsdata analyseren met ANOVA gevolgd door post-hoc toetsen.

6. Percorsi etici, di protezione e di benessere

• Veiligheid: DCK is een psychoactieve dissociatieve stof met onbekende effecten. Vermijd inhalatie van poeder en contact met huid/slijmvliezen. Werk in een zuurkast met handschoenen, labjas en veiligheidsbril.

• Kader bagnato: DCK, als ketamine-analoog, valt zeer waarschijnlijk onder Lijst I of II van de Opiumwet. Bezit, analyse en functioneel testen vereisen een vergunning. Monsterherkomst moet via forensische kanalen.

• Dierethiek: Het gebruik van primaire neuronen uit rattenembryo’s valt onder de Wet op de dierproeven. Het vereist een goedgekeurd dierproefprotocol door een Dierexperimentencommissie (DEC), met strikte naleving van de 3V’s. In dit geval is de doelstelling (risicobeoordeling NPS) relevant voor de volksgezondheid.

7. Tijdsplanning (diagramma di Gantt)

• Fase 1 (M1-3): Literatuurstudie, wettelijke voorbereiding, DEC-aanvraag.

• Fase 2 (M4-5): Methodenontwikkeling en validatie LC-MS/MS.

• Fase 3 (M6): Analyse pellets: kwantificering, uniformiteit, screening.

• Fase 4 (M7-9): In vitro NMDA-receptor bindingsassay.

• Fase 5 (M10-11): In vitro neurotoxiciteitsstudie op primaire neuronen.

• Fase 6 (M12-14): Data-integratie, risicobeoordeling en rapportage.

8. Risultati e discussioni (Kader)

• Een gevalideerde methode voor DCK.

• Aantoonbare variatie in dosis (niet consistent 20 mg) en mogelijke contaminatie met andere dissociatieven.

• In vitro farmacologische data die een hoge affiniteit voor de NMDA-receptor aantonen, mogelijk gelijk aan of hoger dan ketamine.

• Data die acute neurotoxiciteit van DCK in neuronale culturen aantonen, gecorreleerd aan excitotoxiciteit.

• Een gedetailleerde risicobeoordeling die de gevaren van deze ongereguleerde dissociatieve stof benadrukt, vooral voor langdurige of hoge doseringen.

9. La valutazione della ricerca

• In vitro modellen voorspellen complexe gedragseffecten of psychotische episodes slechts indirect.

• Het gebruik van rattenneuronen geeft geen perfect beeld van humane neurotoxiciteit.

• Chronische effecten en blaastoxiciteit (zoals bij ketamine) worden niet onderzocht.

10. Referenti

• Publicaties over de farmacologie van ketamine en PCP.

• Methoden voor primaire neuronale celkweek en neurotoxiciteitstesten.

• Richtlijnen van de Society for Neuroscience voor in vitro neurobiologisch onderzoek.

• EMCDDA rapporten over dissociatieve NPS.

Essentiële Nederlandse Termen:

• Deschloroketamine (DCK) = Deschloroketamine (DCK)

• Arylcyclohexylamine = Arylcyclohexylamine

• NMDA-receptor antagonist = NMDA-receptorantagonist

• Dissociatieve stof = Dissociatieve stof

• Radioligand-bindingsassay = Radioligand-bindingsassay

• Primaire neuronale celkweek = Primaire neuronale celkweek

• Excitotoxiciteit = Excittotoxiciteit

• Neurotoxiciteit = Neurotoxiciteit

• Dosisuniformiteit = Dosisuniformiteit

• Dierexperimentencommissie (DEC) = Dierexperimentencommissie (DEC)

Kritische Waarschuwing: Deschloroketamine is een ongereguleerde, potentieel gevaarlijke dissociatieve stof met onbekende risico’s op neurotoxiciteit en psychose. Onderzoek vereist strikte wettelijke vergunningen en, voor het gebruik van dierlijk weefsel, ethische toetsing. Illegaal gebruik is zeer risicovol. Dit template is bedoeld voor wetenschappelijke risicobeoordeling in een gecontroleerde onderzoeksomgeving.