Metodologia onnicomprensiva: Validazione analitica e studio di dosabilità del 25E-NBOH su blotterdrager
1. Titolo della ricerca
Un titolo specifico, da non sottovalutare:
“Analisi chimico-forense e controllo del rischio dei blotter 25E-NBOH: Kwantificering, zuiverheidscontrole en evaluatie van dosisuniformiteit in illegale preparaten”.” di
“Metodologia per il rilevamento del 25E-NBOH e dei suoi metaboliti: Een geïntegreerde benadering met UPLC-MS/MS en in-vitro toxicologische screening”.”
2. Integrazione e soluzione dei problemi
Achtergrond: Presentiamo il 25E-NBOH (2-[(4-etil-2,5-dimetossifenil)etilamino]etanolo) come una potente fenetilammina di sintesi che si aggiunge alla serie di agonisti dei recettori 5-HT2A della N-benzilfenetilammina (NBOMe/NBOH). Presentare la forma di presentazione sotto forma di piccoli fogli di carta vierkantjes (“blotters” o “zegels”), con scritte a caratteri cubitali, con una dose di arancione superiore a 1,2 milligrammi (MG) - una dose molto più alta di quella dell'LSD. È bene ricordare l'estrema potenza e il rischio elevato di vasocostrizione, ipertermia, psicosi e overlijden.
Problemstelling: Identificare i rischi critici più gravi. Il mercato del 25E-NBOH è completamente aperto. La dose di lavoro per tampone può variare enormemente e può essere (a seconda dei casi) molto più alta di 1,2 mg, che viene somministrata direttamente dal veterinario. I blotter possono essere sottoposti a verifica con altre impurità di sintesi, per lo più non gevaarlijkere NBOMe/NBOH-analoghe. Si tratta di un problema che riguarda i metodi più diffusi per questa specifica matrice, per il quale è necessaria la rilevazione forense e la comunicazione del rischio.
Onderzoeksvraag: “Qual è la nauwkeurigheid della dose e la chemicalische zuiverheid dei blotter da 1,2 mg di 25E-NBOH reperibili in commercio, e qual è l'acute cytotoxiciteitsprofiel del verbinding geëxtraheerde?”.”
Doelstellingen:
Zoccolo: L'introduzione di una piattaforma analitica di alto livello per la valutazione della qualità e della trasparenza dei blotter 25E-NBOH illegali, che include la valutazione del dosaggio, la verifica della contaminazione e un'analisi più approfondita. in vitro Rischio tossicologico.
Specifiche richieste:
Definizione e valutazione di un metodo UPLC-MS/MS di ultima generazione e specifico per la quantificazione del 25E-NBOH in microgrammi e milligrammi.
Valutazione dell'uniformità della dose all'interno di una vena e tra le varie velleità mediante analisi di almeno 20 singoli blotter su più bronzi.
Utilizzo di uno screening non distruttivo (LC-HRMS) per lo screening di altri derivati di NBOMe/NBOH (tra cui 25I-, 25B-, 25C-NBOH), precursori chimici e prodotti di degradazione.
Valutazione di in vitro citotossicità del 25E-NBOH su una cellula endoteliale umana (bijv. HUVEC) per ridurre il rischio di tossicità vascolare.
3. Letteratura
Revisione della letteratura scientifica su farmacologia, tossicologia e casi forensi di legami NBOMe/NBOH.
Analisi dei rapporti di utilizzo e dei dati delle autorità locali (RIVM, Trimbos, EMCDDA) sui rischi specifici della serie 25x-NBOH.
Studio dei migliori metodi analitici per le fenetilammine in grandi concentrazioni in matrici complesse.
Distribuzione di letteratura su in vitro modelli di vasocostrizione e disfunzioni endoteliali.
4. Metodologia onderzoeks (Materiaal en Methoden)
4.1 Tipo Onderzoek: Sperimentale, analitico e in vitro la ricerca di tossicodipendenti.
4.2 Studio di settore: Analisi di laboratorio di mostri di tampone e di esperimenti su cellule.
4.3 Materia:
Stoffen: Standard di riferimento 25E-NBOH (tramite leva forense o specialistica). Standard interno (tramite un gelabeld fenethylamine-derivaat). Cellule endoteliali della vena umbra umana (HUVEC).
Apparatuur: Sistema UPLC-MS/MS, LC-HRMS (QTOF), strumentazione per celkweak (incubatore di CO2, microplatenlezer), balani analitici.
4.4 Metodi:
Monstervoorbereiding:
Estrazione: Mettere ogni singolo blotter in una fiala separata. Utilizzare un volume esatto di metanolo o acetonitril/acqua, incluso lo standard interno. Eseguire un'analisi a ultrasuoni per 15 minuti per un'estrazione ottimale.
Verdunning: A causa dell'elevata concentrazione di mg (mg-bereik), sono state riscontrate gravi verdoni da iniettare nel sistema SM.
Kwantificering en Validatie (UPLC-MS/MS):
Cromatografia: Usare un modulo UPLC C18. Fase mobile: tampone di ammonio o di acetato con metanolo/acetonitrile.
Massaspectrometrie: Modalità ESI+. Sono state inserite specifiche transizioni MRM per il 25E-NBOH (frammento [M+H]+ → karakteristiek).
Validazione: Valido per un dosaggio di linea di razza (0,1 - 10 µg/mL). Concentrarsi su precisione, innocuità e LOQ.
Dosi uniformi: Utilizzare gemiddelde, standaarddeviatie e RSD% per l'innalzamento del volume per ogni filtro. Indicare la varianza tra i ranghi e la mezzeria di un vassoio.
Zuiverheids-/Contaminatiescreening (LC-HRMS): Per ottenere un'acquisizione di dati non discriminatoria (DDA). Utilizzate un software per cercare di ottenere dei collegamenti veritieri sulla base della massa e della frammentazione.
In vitro Test di citotossicità (saggio MTT/XTT su cellule HUVEC):
Incubare le cellule HUVEC con una concentrazione di 25E-NBOH (e un altro standard) per 24 ore.
Conoscere la vitalità delle cellule. La concentrazione che le cellule 50% hanno raggiunto (IC50) è un indicatore del potere citotossico acuto, rilevante per la distruzione vascolare.
5. Analisi dei dati e statistiche
L'analisi dei dati è stata effettuata con una correzione standardizzata interna e una calibrazione esterna.
I dati sulla citotossicità vengono analizzati con una regressione non lineare per valutare i valori di IC50.
Utilizzate le statistiche dettagliate per tutti i set di dati.
6. Percorsi etici, di protezione e di benessere
Veiligheid: 25E-NBOH è un prodotto potente e innovativo. Vermijd Assolutamente un'ottima soluzione via huid, slijmvliezen o inhalatie van poeder. Lavora in un goedgekeurde zuurkast incontrato mani dubbie (nitrile), een niet-doorschijnende labjas, veiligheidsbril en een FFP2/FFP3-stofmascheratore per l'utilizzo di poeders o concentrati.
Kader bagnato: Il 25E-NBOH è un prodotto psicoattivo di prestigio che va bene per tutti. La lista I dell'Opiumwet. L'analisi, l'analisi e l'estrazione per l'analisi del lavoro sono le caratteristiche principali di questo lavoro. un'esecuzione a regola d'arte. L'unico strumento etico per i mostri è l'identificazione forense (in collaborazione con l'IFN/politica).
Etica:In vitro gli studi con i cellijnen vereisen non sono METC-goedkeuring. L'eredità dei mostri illegali deve essere legale e tracciabile (‘catena di custodia’).
7. Tijdsplanning (diagramma di Gantt)
Fase 1 (M1-3): Studi letterari, analisi del rischio, analisi del rischio e coordinamento forense.
Fase 2 (M4-5): Metodologia e validazione UPLC-MS/MS.
Fase 3 (M6-7): Estrazione e analisi dei blotter (kwantificering e screening).
Fase 4 (M8-9):In vitro studio di citotossicità su cellule HUVEC.
Fase 5 (M10-12): Integrazione dei dati, ordinamento del rischio e rapporto.
8. Risultati e discussioni (Kader)
Un metodo valido e funzionale per il 25E-NBOH.
I dati che indicano che la dose di lavoro è sempre onnauwkeurig e sterk possono variare (bv. 0,5 - 3 mg), con una scarsa uniformità.
Rilevamento di altri NBOH/NBOMe-analoghi come verontreiniging o bewuste vervalsing.
Un valore di IC50 che indica l'elevata citotossicità acuta del 25E-NBOH sulle cellule endoteliali, che comporta un rischio per la vasocostrizione e l'instabilità.
Un'analisi dei rischi per gli utenti, con indicazioni per la definizione delle priorità forensi e per le valutazioni pubbliche.
9. La valutazione della ricerca
In vitro La citotossicità è un modello vero e proprio per i complessi. in vivo effetti vascolari.
I mostri in questione non rappresentano la totalità del mercato.
La metabolizzazione e la farmacocinetica nell'uomo sono fondamentali.
10. Referenti
Wetenschappelijke publicaties over NBOMe/NBOH-toxicologie (bv. Giornale di tossicologia analitica, Psicofarmacologia).
Risicobeoordelingen forensi dell'OEDT e dell'Istituto Trimbos.
SWGDRUG: analisi degli NPS.
Nederlandse Opiumwet.
Essentiële Nederlandse Termen:
25E-NBOH = 25E-NBOH
N-benzilfenetilammina = N-benzilfenetilammina
Blotter = Blotter (papierdrager / zegel)
Dosisuniformiteit = Dosisuniformiteit
UPLC-MS/MS = UPLC-MS/MS
Screening non bersagliato = screening non bersagliato
CRITICA: 25E-NBOH si riferisce alla categoria più importante di NPS a causa dell'estrema potenza e del dosaggio elevato. L'articolo contiene tutte le informazioni più importanti sulla sicurezza (BSL-2/3 voorwaarden). È destinato anche a laboratori forensi o tossicologici specializzati, con un'ampia gamma di controlli. L'uso di questo modello è da considerarsi in contrasto con le intossicazioni eterne e con le sovracorrenti. Questo modello è utile per le attività metodologiche accademiche e forensi.
English 
Deutsch 
Nederlands 
Français 
Italiano 
Português 
Español 
Русский 
Polski 
Türkçe 
Українська 
Română